2. GRENSREACTIE OP EN TELLING VAN ENTEROBACTERIACEAE

2.1. Grensreactie (voor het aantonen in een voorgeschreven hoeveelheid)

2.1.1. Definitie

Enterobacteriaceae worden geacht aanwezig te zijn, indien na bebroeding van een mengsel van het desbetreffende medium en 3 porties van 1 ml van de voorgeschreven volgens 2.1.2 bereide verdunning van de te onderzoeken waar, een en ander als beschreven onder 2.1.3, bij 30 ± 1°C micro-organismen tot ontwikkeling komen, die bij afstrijken op het onder 2.1.4 genoemde medium kolonies geven die bij bevestiging volgens 2.1.5 het onder 2.1.6 vermelde reactiepatroon vertonen.

2.1.2. Verdunning

Hiervoor zij verwezen ngar 1.2.

2.1.3. Ophoping (met voorbebroeding)

2.1.3.1. medium voorde voorbebroeding

pepton 10 g natriumchloride p.a. 5 9 kaliumdiwaterstoffosfaat (KH 2 P0 4 ) p.a. 1,5 g dinatriumwaterstoffosfaat (Na ; HP0 4 .2H 3 O) p.a. 9,0 g water 1000 ml

Los de overige ingrediënten in het water op en breng de pH op 7,0 ± 0,1 Vul af in buizen in porties van 15 ml en steriliseer gedurende 20 min. bij 120° C.

2.1.3.2. medium voor de ophoping (zie 7.3)

pepton 10 g glucose 5 g dinatriumwaterstoffosfaat (Na 2 HP0 4 .2H 2 O) p.a. 8 g kaliumdiwaterstoffosfaat (KH 2 P0 4 ) p.a. 2 g gedroogde rundergal 20 g briljantgroen 15 mg water 1000 ml

Los de overige ingrediënten in het water op en breng de pH op 7,2 ± 0,1. Vul af in buizen in porties van 15 ml.

Verhit de buizen gedurende 30 min. op 100°C. Verhitting gedurende langere tijd of bij hogere temperatuur is niet nodig en bovendien ongewenst.

2.1.3.3. werkwijze

Breng 1 ml van de vereiste volgens 2.1.2 bereide verdunning in een buis met het volgens 2.1.3.1 bereide medium. Verricht dit in drievoud. Bebroed 16-18 uur bij 30 ± 1°C.

Breng daarna uit elke buis 0,1 ml over in een buis met 15 ml van het onder

2.1.3.2. genoemde medium. Bebroed deze 3 nieuwe buizen 24 uur bij 30 ± 1° C. Strijk daarna uit elk ervan af op het onder 2.1.4 genoemde medium.

2.1.4. Isolatie

2.1.4.1. medium (zie 7.4)

pepton gistextractpoeder glucose natriumchloride p.a. galzouten neutraalrood kristalviolet agar water 7 g 3 g 10 g 5 9 1,5 9 30 mg 2 mg 15 mg 1000 ml